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蜂蜜中獸藥殘留檢測方法的研究進(jìn)展

文檔作者：張璐孔祥虹何強(qiáng) 鄒陽李瑩付騁宇文檔來源：陜西出入境檢驗(yàn)檢疫局		點(diǎn) 擊數(shù)：	更新時(shí)間： 2025年06月27日
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第6 卷 第11 期 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào) Vol. 6 No. 11
2015 年11 月 Journal of Food Safety and Quality Nov. , 2015
基金項(xiàng)目: 陜西省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012K02-13)
Fund: Supported by the Science and Technology Project of Shaanxi Province (2012K02-13)
*通訊作者: 張璐, 工程師, 碩士, 主要研究方向?yàn)槭称钒踩珯z測方法。E-mail: lindazhanglu@126.com
*Corresponding author: ZHANG Lu, Engineer, Shaanxi Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, No. 10 Hanguang North Road, Xi’an,
710068, China, E-mail: lindazhanglu@126.com
蜂蜜中獸藥殘留檢測方法的研究進(jìn)展
張 璐*, 孔祥虹, 何 強(qiáng), 鄒 陽, 李 瑩, 付騁宇
(陜西出入境檢驗(yàn)檢疫局, 西安 710068)
摘要: 隨著我國蜂業(yè)的發(fā)展, 蜂蜜中獸藥殘留問題日益成為食品安全領(lǐng)域的重要內(nèi)容, 引起世界范圍內(nèi)的廣
泛關(guān)注。獸藥殘留不僅危害人體健康也對我國蜂蜜的出口帶了嚴(yán)重的阻力。近年來國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總
局、農(nóng)業(yè)部及衛(wèi)生與計(jì)劃生育委員會等對此加大重視程度。由于蜂蜜基質(zhì)復(fù)雜, 其中獸藥殘留含量較低, 因此,
發(fā)展快速、簡易、高靈敏度、高通量的獸藥檢測技術(shù)成為了目前迫切的需要。本文結(jié)合蜂蜜中獸藥殘留的現(xiàn)
狀, 對目前蜂蜜中獸藥殘留的不同檢測方法(液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、免疫分析法、分子印跡法、毛細(xì)管電泳法
等技術(shù))進(jìn)行了闡述, 并對獸藥殘留檢測技術(shù)在未來的發(fā)展方向進(jìn)行了進(jìn)一步展望。
關(guān)鍵詞: 蜂蜜; 獸藥殘留; 檢測方法
Research advances on the detection method of veterinary drug residues
in honey
ZHANG Lu*, KONG Xiang-Hong, HE Qiang, ZOU Yang, LI Ying, FU Cheng-Yu
(Shaanxi Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Xi’an, 710068, China)
ABSTRACT: With the development of apiculture, veterinary drug residues in honey have become a crucial issue
in food quality and safety. Veterinary drug residues endanger the health of human being, and affect the export
of bee products. Recently, the General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine
of China, Ministry of Agriculture of China, National Health and Family Planning Commission of China have
paid more attention to the honey market. Because of the complexity of honey matrix and the trace amount of
veterinary drug residues, therefore, it is necessary for the development of rapid, simple and easy, high sensitivity,
high throughput of veterinary drug detection technology. In the paper, combined with the situation of veterinary
drug residues in honey, the different detection methods of these veterinary drug residues in recently year
were reviewed, including liquid chromatography-tandem mass spectrometry, immunoassay method, molecular
imprinting method and capillary electrophoresis. The future direction of the development of veterinary drug residues
detection technology was prospected.
KEY WORDS: honey; veterinary drug residues; detection method
第11 期 張 璐, 等: 蜂蜜中獸藥殘留檢測方法的研究進(jìn)展 4369
1 引 言
我國是蜂蜜出口量最大的發(fā)展中國家, 其中大部分
產(chǎn)品銷往美國、歐盟、日本等國家, 占我國蜂蜜總出口量
的80%, 占全球出口總量的25%[1]。近年來, 我國蜂蜜的主
要出口國及地區(qū)的檢測部門在對來自我國的蜂蜜進(jìn)行抽檢
時(shí)屢次發(fā)現(xiàn)獸藥殘留超標(biāo)問題[2]。因此蜂產(chǎn)品的質(zhì)量安全
要從源頭抓起, 加大蜂產(chǎn)品質(zhì)量控制及獸藥殘留檢測監(jiān)
管。本文對蜂產(chǎn)品中獸藥殘留的來源、檢測技術(shù)現(xiàn)狀及未
來檢測方向進(jìn)行分析, 以期為蜂蜜獸藥殘留檢測方法的開
發(fā)提供一定理論基礎(chǔ)。
2 蜂產(chǎn)品獸藥殘留的現(xiàn)狀
2.1 藥物殘留的來源
蜂蜜中獸藥殘留一方面來源于養(yǎng)蜂過程中養(yǎng)殖戶為
預(yù)防蜜蜂疾病而使用違禁藥物和/或長期超量使用獸藥,
又或在用藥期仍然搖蜜或采漿, 導(dǎo)致蜂產(chǎn)品中獸藥殘留超
標(biāo)[3]。另一方面由于抗生素被廣泛用于飼料添加劑中, 因
此會帶入蜂蜜中導(dǎo)致產(chǎn)生一定殘留[4]。2002 年由于在從我
國進(jìn)口的蜂蜜中檢出氯霉素、鏈霉素殘留量超標(biāo)(歐盟
2002/69/EC 禁令), 歐盟以此為由, 全面禁止中國蜂蜜進(jìn)入
歐盟市場, 對中國蜂蜜產(chǎn)業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[5]。盡
管在2005 年恢復(fù)了中國蜂蜜對歐盟國家的出口, 但歐盟成
員國對中國蜂蜜執(zhí)行十分嚴(yán)苛的檢驗(yàn)監(jiān)管政策。日本同樣
對我國出口的蜂產(chǎn)品實(shí)施嚴(yán)格的監(jiān)管政策, 對我國輸日的
蜂王漿中氯霉素實(shí)施批批檢測的要求, 并且要求氯霉素不
得檢出[6]。上述問題的出現(xiàn)致使當(dāng)年我國蜂產(chǎn)品加工、出
口企業(yè)損失慘重。
2.2 常用的獸藥種類
目前常用于養(yǎng)蜂業(yè)的獸藥包括氯霉素、硝基咪唑類
(甲硝唑、二甲硝唑、洛硝達(dá)唑)、氨基糖苷類(鏈霉素、雙
氫鏈霉素)、四環(huán)素類(四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素、土霉
素)、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類、磺胺類、頭孢類、硝基呋
喃及其代謝物。這些獸藥在蜂蜜中殘留量超標(biāo)極大地影響
了我國蜂蜜以及其他蜂產(chǎn)品的質(zhì)量安全, 威脅人體健康,
如在對陜西出產(chǎn)的蜂蜜檢測中發(fā)現(xiàn)氯霉素, 四環(huán)素族,
大環(huán)內(nèi)酯類中的林可霉素、紅霉素, 磺胺類中的磺胺甲基
異噁唑的檢出率較高, 尤其是氯霉素的檢出率在15%左
右[7]。而且也極大影響到我國蜂產(chǎn)品在國際上的聲譽(yù)。目
前國外研究者高度重視蜂蜜中多種獸藥殘留的檢測技術(shù)
及方法研究[8]。
2.3 藥物殘留的危害
蜂產(chǎn)品中獸藥殘留對人體造成的危害具有一定的隱
蔽性, 但卻能造成實(shí)質(zhì)性和不可逆的危害[9], 主要集中在
以下幾個(gè)方面:
2.3.1 過敏反應(yīng)
長期食用含有低劑量抗生素的蜂蜜, 會導(dǎo)致由于反
復(fù)受到抗生素的刺激而被致敏; 被致敏后再次接觸同種抗
生素時(shí), 極易產(chǎn)生過敏反應(yīng)[10]。
2.3.2 細(xì)菌耐藥性
經(jīng)常食用含有抗生素殘留的食品, 可使某些菌株由
于反復(fù)接觸而產(chǎn)生抗藥性, 尤其是金黃葡萄球菌和腸桿菌
科的細(xì)菌[11]。由于耐藥菌株的存在使得普通抗生素的療效
大大降低, 需要借助于更高級的抗生素進(jìn)行治療, 造成惡
性循環(huán)。以感染甲氧西林金黃葡萄球菌(MRSA)為例, 耐藥
性患者與非耐藥性患者相比, 死亡率高出近64%[12]。
3 蜂產(chǎn)品獸藥殘留檢測方法
目前我國檢測蜂蜜中獸藥殘留的檢測技術(shù)主要有離
線凈化-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)[13-15], 在線凈化-液相色譜
串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)[16], 免疫分析技術(shù)[17], 分子印跡技術(shù)[18,19],
毛細(xì)管電泳技術(shù)。
3.1 離線凈化-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜
離線凈化-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)是目前應(yīng)用最為廣
泛的針對動物源性食品中獸藥殘留檢測的手段。該項(xiàng)技術(shù)
可獲得單一分析技術(shù)難以達(dá)到的效果, 在實(shí)現(xiàn)色譜分離的
基礎(chǔ)上, 利用待測化合物質(zhì)荷比之間的差別進(jìn)行高靈敏度
的檢測。目前我國對于蜂蜜及蜂產(chǎn)品中大多數(shù)獸藥殘留均
制定了相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)[20-28]、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[29,30]。液相色譜串
聯(lián)質(zhì)譜不僅能應(yīng)用于同一類獸藥殘留的檢測, 同時(shí)進(jìn)行不
同種類的獸藥的同時(shí)檢測。Galarini 等[31]研究了利用液質(zhì)
聯(lián)用技術(shù)檢測蜂蜜中鏈霉素殘留的方法, 該方法利用水提
取, HLB 小柱凈化的, 在2.5、10、15、20 μg/kg 這4 個(gè)加
標(biāo)水平上回收率均接近100%, 檢出限可達(dá)3.0 μg/kg。Wang
等[13]建立利用新型聚乙烯醇固相萃取技術(shù)測定蜂蜜中氨
基糖苷類獸藥殘留的方法, 該方法有良好的回收率, 范圍
在84%~112%之間, 較好的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差, 方法的檢出限
為7.8~19.4 ng/mL。Shendy 等[34]建立了QuEChERS 結(jié)合液
相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測蜂蜜中硝基咪唑類獸藥殘留的方
法。該方法檢出限為 3.0 ?g/kg, 在 0.5、1.0、1.5 μg/kg 三
個(gè)水平加標(biāo), 回收率在90.9 %~104.8 %之間。何強(qiáng)等[32]建
立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)同時(shí)檢測
蜂蜜中硝基咪唑、磺胺類、喹諾酮類獸藥殘留, 利用緩沖
鹽溶液提取, 固相萃取柱凈化, 在ESI 正模式下進(jìn)行分析。
結(jié)果表明, 這36 種獸藥的檢出限在0.4~4.0 ng/mL, 在1.0、
2.0、5.0 μg/kg 這3 個(gè)水平的加標(biāo)回收率在63.2%~125.5%
之間, 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低于22%。侯建波等[33]建立了固相萃
取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)檢測蜂蜜中磺胺類、硝基咪唑
類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可酰胺類和吡喹酮等6 大
類54 種獸藥殘留的方法。該方法利用緩沖鹽提取, HLB 小
4370 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào) 第6 卷
柱凈化, 同位素內(nèi)標(biāo)定量, 結(jié)果表明6 大類獸藥殘留的檢
出限在0.3~2.0 μg/kg 之間, 總體回收率為32.6%~114%之
間。盡管上述報(bào)道存在標(biāo)準(zhǔn)偏差較大或某些化合物的回收
率偏低等問題, 但可以實(shí)現(xiàn)對多種獸藥殘留的初步篩選。
隨著液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進(jìn)一步的發(fā)展, 其靈敏
度將會繼續(xù)提高。與此同時(shí), 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)
也存在一定的問題。例如樣品需要進(jìn)行高度凈化, 去除雜
質(zhì)、基質(zhì)等的影響; 這就決定了其前處理過程較為復(fù)雜。
分析我國目前制定的關(guān)于蜂蜜中獸藥殘留的檢測方法, 發(fā)
現(xiàn)大部分獸藥殘留, 需要先進(jìn)行提取和固相萃取小柱凈化
后, 才能夠進(jìn)入儀器檢測, 耗時(shí)長, 且液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜
儀器的操作較為復(fù)雜對于檢測人員要求較高。
3.2 在線凈化-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜
在線凈化(TF)技術(shù)是目前國際上集凈化和檢測為一
體的新型檢測技術(shù)。與傳統(tǒng)的提取方法相比, 在線凈化技
術(shù)通過擴(kuò)散溶解、尺寸排阻、柱層析等技術(shù)將蛋白等一些
大分子物質(zhì)濾掉, 保留目標(biāo)小分子; 并通過與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)
用, 簡化前處理流程、在實(shí)現(xiàn)在線凈化功能的同時(shí)保證了
方法的檢測靈敏度。目前張璐等[16]利用該技術(shù)建立了在線
凈化-超高效液相色譜同位素稀釋串聯(lián)質(zhì)譜法檢測蜂蜜中
硝基咪唑類及其代謝物的殘留的方法, 該方法檢出限為
0.1~1.0 μg/kg, 在4 個(gè)添加水平的回收率為73.7%~116.4%,
RSD 為1.1%~9.1%, 該方法可在20 min 完成所有檢測工
作。艾連峰等[35]建立了在線凈化液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定
動物源食品中金剛烷胺的殘留的方法, 該方法檢出限為
0.25~0.5 μg/kg, 添加回收率為83.3%~93.6%。該技術(shù)的優(yōu)
勢在于可將樣品凈化和樣品分離結(jié)合在一起, 在保證凈化
效果的前提下縮短檢測周期。但是其缺點(diǎn)在于這類儀器一
般價(jià)格較高, 不利于普及。目前利用該項(xiàng)技術(shù)開展蜂蜜中
獸藥殘留檢測研究的機(jī)構(gòu)不多。
3.3 免疫分析法
免疫分析法是以抗原與抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)檢測
各種物質(zhì)(藥物、激素、蛋白質(zhì)、微生物等)的分析方法, 具
有特異性強(qiáng), 靈敏度高(檢出限到1 pg~1 μg), 方便快速,
分析成本低等優(yōu)點(diǎn)。目前應(yīng)用最多、最成熟的技術(shù)為酶聯(lián)
免疫吸附測定法(ELISA), 該方法已被廣泛應(yīng)用于動物源
性食品、植物源性食品等的檢測中。目前制定了利用該技
術(shù)檢測動物源性食品中玉米赤霉烯醇[36]、蜂蜜中四環(huán)素族
[37]、糖皮質(zhì)類[38]、鏈霉素[39]、蜂蜜中氯霉素[40]等的國家及
行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。國內(nèi)外也有學(xué)者利用該項(xiàng)技術(shù)測定動物源性食
品中獸藥殘留。Zhou 等[41]建立了動物源性食品中磺胺類藥
物殘留的酶聯(lián)免疫檢測方法, 該方法通過制備具有特異性
的單克隆抗體實(shí)現(xiàn)對磺胺類藥物的選擇特異性檢測。同時(shí)
國外許多公司已將微生物法試劑盒商品化[42,43]。但是
ELISA 不可避免地存在一定的缺陷: 對于試劑的選擇性很
高, 很難實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測多種成分的功能, 對于結(jié)構(gòu)相似的
化合物在一定程度上存在交叉反應(yīng), 在分析小分子和不穩(wěn)
定化合物方面有一定困難。
3.4 分子印記技術(shù)
分子印跡技術(shù)是通過人工合成手段將印跡分子與聚
合物鍵合, 獲得在空間結(jié)構(gòu)上和結(jié)合位點(diǎn)與模板分子匹配
的具有多重作用的空穴, 這種空穴對模板分子及其類似物
具有選擇識別性。該項(xiàng)技術(shù)目前應(yīng)用于非法添加、藥物、
激素、蛋白質(zhì)等的分離工作。戴晴等[44]通過沉淀聚合法制
備了對蘇丹紅Ι 具有特異性吸附的分子印跡聚合物。Jin 等
[45]采用沉淀聚合法, 以四環(huán)素為模板分子, 合成對四環(huán)素
族類抗生素具有特異性識別的分子印跡聚合物, 以該分子
印跡聚合物為固相萃取柱填料, 建立了分子印跡固相萃取
-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測食品中四環(huán)素族殘留的檢測
方法。與C18、HLB 等固相萃取小柱相比較, 該分子印跡
固相萃取柱具有更好的凈化效果。對于四環(huán)素族殘留的檢
測回收率范圍為94.51%~103.0%, 檢出限為0.1~0.3 μg/kg。
目前該方法仍處于實(shí)驗(yàn)室研究階段還沒有被廣泛應(yīng)用。
3.5 毛細(xì)管電泳法
毛細(xì)管電泳法已逐步成為分離科學(xué)中的新興研究領(lǐng)
域。具有操作簡便、柱效高、分離速度快等特點(diǎn)。毛細(xì)管
電泳利用樣品在電場作用下形成帶電粒子, 在電泳和電滲
流的共同作用下, 帶電粒子的遷移速度不同, 陽離子在負(fù)
極最先流出, 中性粒子隨后, 最后流出的是陰離子的特點(diǎn),
從而實(shí)現(xiàn)對化合物的分離。毛細(xì)管電泳根據(jù)樣品組分在緩
沖溶液中所受作用的不同可分為: 毛細(xì)管區(qū)帶電泳、毛細(xì)
管凝膠電泳、膠束電動毛細(xì)管色譜、毛細(xì)管等電聚焦、毛
細(xì)管等速電泳、毛細(xì)管電動色譜、毛細(xì)管微乳電動色譜等
不用類型。但鑒于毛細(xì)管電泳法在測定時(shí)存在重現(xiàn)性不穩(wěn)
定的情況, 因此在實(shí)際檢測中的應(yīng)用受到一定限制。Ge 等
[46]利用毛細(xì)管電泳技術(shù)建立了測定氨基糖苷類藥物的檢
測方法。樣品經(jīng)過C18 固相萃取柱凈化后, 進(jìn)入毛細(xì)管電泳
-安培檢測器檢測?；擒疹愃幬锏臋z出限為0.62~8.6
nmol/L。Santos 等[47]利用毛細(xì)管電泳技術(shù)建立了同時(shí)檢測
氨芐西林、青霉素G、阿莫西林、氯唑西林、四環(huán)素、氯
霉素的方法。該方法在pH=8 的2.7×10-2 mol/L KH2PO4, 及
4.3×10-2 mol/L Na2B4O7 的混合緩沖溶液體系中, 加載18
kV 電壓, 利用毛細(xì)管電泳-紫外檢測器在210 nm 下實(shí)現(xiàn)了
不同類別抗生素的同時(shí)檢測, 檢測限為2.5~5.0 μg/kg?；?
收率均超過72%。
4 展 望
綜上所述, 在當(dāng)今日益重視食品安全和環(huán)境保護(hù)的
發(fā)展趨勢下, 快速、便攜的篩選性同步檢測多殘留技術(shù)將
會成為未來食品檢測技術(shù)的主流趨勢。在未來將更加側(cè)重
第11 期 張 璐, 等: 蜂蜜中獸藥殘留檢測方法的研究進(jìn)展 4371
利用高效、高靈敏的檢測技術(shù)開發(fā)多類殘留物同時(shí)檢測的
方法。隨著儀器分析技術(shù)的不斷提高, 污染物質(zhì)質(zhì)譜庫的
逐漸完善, 利用快速溶劑萃取、超臨界溶劑萃取等樣品前
處理技術(shù), 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜、超高效液相色譜串
聯(lián)高分辨臺式四極桿靜電場軌道阱質(zhì)譜等高分辨質(zhì)譜技術(shù),
可進(jìn)一步完善檢測技術(shù), 提高分析效率, 降低檢測成本。
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(責(zé)任編輯: 白洪健)
作者簡介
張 璐, 碩士, 主要研究方向?yàn)槭称?
安全檢測方法。
E-mail: lindazhanglu@126.com

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