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免疫法快速檢測食品中黃曲霉毒素的研究進(jìn)展

文檔作者：畢水蓮黃思敏文檔來源：廣東藥學(xué)院食品科學(xué)學(xué)院		點(diǎn) 擊數(shù)：	更新時(shí)間： 2025年07月02日
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上一篇：免疫檢測技術(shù)在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

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第6 卷 第9 期 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào) Vol. 6 No. 9
2015 年9 月 Journal of Food Safety and Quality Sep. , 2015
基金項(xiàng)目: 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31401596)、廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(S2013040013491)、廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014A040401087)、
廣東省醫(yī)學(xué)科研基金項(xiàng)目(B2014205)和廣東省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201410573030)
Fund: Supported by the National Natural Science Foundation of China (31401596), the Natural Science Foundation of Guangdong Province
(S2013040013491), Science and Technology Planning Project of Guangdong Province (2014A040401087), Medical Scientific Research
Foundation of Guangdong Province (B2014205) and Undergraduate Training Programs for Innovation and Entrepreneurship of Guangdong
Province (201410573030)
*通訊作者: 畢水蓮, 副教授, 主要研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量安全及檢測技術(shù)研究。E-mail: bishuilian@163.com
*Corresponding author: BI Shui-Lian, Associate Professor, School of Food Science, Guangdong Pharmaceutical University, Zhongshan 528458,
China. E-mail: bishuilian@163.com
免疫法快速檢測食品中黃曲霉毒素的研究進(jìn)展
畢水蓮*, 黃思敏
(廣東藥學(xué)院食品科學(xué)學(xué)院, 中山 528458)
摘要: 黃曲霉毒素(aflatoxin)是由霉菌黃曲霉和寄生曲霉感染后產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物, 是自然界中毒性最強(qiáng)
的化合物之一, 被世界衛(wèi)生組織的癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)劃定為I 類致癌物質(zhì), 與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)。黃曲霉
毒素很容易污染谷物、堅(jiān)果、香料、植物油脂、乳類及其制品等多種食品。因此, 研究出快速、準(zhǔn)確、高效的
食品中黃曲霉毒素的檢測方法是政府、企業(yè)和研究者們一直以來的共同目標(biāo)。本文綜述了近年來基于免疫技
術(shù)發(fā)展的各種快速檢測黃曲霉毒素方法, 主要包括酶聯(lián)免疫吸附測定法、膠體金免疫層析法、免疫傳感器、免
疫親和柱-高效液相色譜法、免疫熒光法、放射免疫法、時(shí)間分辨熒光免疫分析法和量子點(diǎn)探針法的基本原理、
適用范圍、檢測效果、優(yōu)缺點(diǎn)及國內(nèi)外應(yīng)用等方面進(jìn)展, 為今后研發(fā)更優(yōu)的檢測黃曲霉素新方法提供借鑒。
關(guān)鍵詞: 黃曲霉毒素; 免疫法; 快速檢測
Advances in the rapid detection of aflatoxin in foodstuffs by immunising
method
BI Shui-Lian*, HUANG Si-Min
(School of Food Science, Guangdong Pharmaceutical University, Zhongshan 528458, China)
ABSTRACT: Aflatoxin is secondary metabolites produced by Aspergillus species of fungi. As one of the most
toxic compounds in nature, aflatoxin has been classified by the International Agency for Research on Cancer
(IARC) as group I carcinogen and is closely related to the development of liver cancer. Cereals, nuts, spices,
vegetable oil, milk and their products are the most susceptible commodities to aflatoxin. Therefore, it is a
common goal for the government, enterprises and researchers to detect aflatoxin in foodstuffs rapidly,
accurately and efficiently. In this paper, the principle, effect, characteristics and application of the methods,
including enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), colloidal gold immunoassay, immunosensor assay,
immunoaffinity column clean-up and high performance liquid chromatography (HPLC), immunofluorescencebased
measurement, radio immunoassay, time resolved fluoroimmunoassay and quantum dots as fluorescent
probes assay based on immune technology, were reviewed, so as to provide important references for the
development of new superior detection methods of aflatoxin.
KEY WORDS: aflatoxin; immunising method; rapid detection
第9 期 畢水蓮, 等: 免疫法快速檢測食品中黃曲霉毒素的研究進(jìn)展 3531
1 引 言
黃曲霉毒素(aflatoxin, AF)是由霉菌黃曲霉和寄生曲
霉感染后產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物[1], 目前已發(fā)現(xiàn)的黃曲霉毒
素有20 多種[2], 主要為B1、B2、G1、G2、M1 和M2。從化
學(xué)結(jié)構(gòu)上看, 各種黃曲霉毒素的結(jié)構(gòu)非常相似, 均含有二
呋喃環(huán)和氧雜萘鄰?fù)?香豆素)。黃曲霉毒素的理化性質(zhì)比
較穩(wěn)定, 難溶于水、己烷、乙醚和石油醚, 易溶于甲醇、乙
醇、氯仿、乙腈和二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑, 對光、熱和
酸穩(wěn)定, 遇堿后能迅速分解。黃曲霉毒素的毒性極強(qiáng), 且具
有明顯的致癌能力。其中AFB1 毒性最大, 致癌能力最強(qiáng),
G1、M1 其次, B2、G2 和M2 相對較弱。AFB1 的LD50 為0.249
mg/kg, 屬于特劇毒物質(zhì), 其毒性為氰化鉀的10 倍、砒霜
的68 倍、三聚氰胺的416 倍。其致癌力為已知致癌物二甲
基亞硝胺的70 倍、奶油黃(甲基偶氮苯)的900 倍、六六六
的10000 倍, 1993 年被世界衛(wèi)生組織癌癥研究機(jī)構(gòu)
(International Agency for Research on Cancer, IARC)劃定為
I 類致癌物質(zhì)[3]。
黃曲霉毒素廣泛存在于谷物農(nóng)產(chǎn)品和食品中, 因其
危害巨大, 世界各國普遍制定了黃曲霉毒素的最大限量標(biāo)
準(zhǔn)。我國衛(wèi)生部規(guī)定玉米、花生仁、花生油中AFB1 的含
量不能超過20 μg/kg, 大米、其他食用油中AFB1 的含量不
能超過10 μg/kg, 豆類、發(fā)酵食品中AFB1 的含量不能超過
5 μg/kg, 鮮乳中AFM1 含量不能超過0.5 μg/kg, 嬰幼兒食
品及乳粉中的黃曲霉毒素不得檢出。美國聯(lián)邦政府有關(guān)法
律規(guī)定人類消費(fèi)食品和奶牛飼料中的黃曲霉毒素含量(指
B1+B2+G1+G2 的總量)不能超過 20 μg/kg, 牛奶中的含量不
能超過0.5 μg/kg。而歐盟規(guī)定比較嚴(yán)格, 要求人類生活消
費(fèi)品谷物中的黃曲霉毒素B1 的含量不能超過2 μg/kg, 總
量不能超過4 μg/kg, 牛奶及奶制品中的AFM1 含量不能超
過0.05 μg/kg, 花生及其他直接供人類食用的堅(jiān)果中黃曲
霉毒素含量(指B1+B2+G1+G2 的總量)不能超過5 μg/kg。這
些嚴(yán)格的黃曲霉毒素限量要求, 使得黃曲霉毒素的檢測受
到了廣泛關(guān)注。
免疫學(xué)方法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡便等特
點(diǎn), 近年來國內(nèi)外學(xué)者不斷將免疫學(xué)方法引入黃曲霉毒素
的測定中, 本文就近年來國內(nèi)外廣泛采用的食品中黃曲霉
毒素免疫檢測法的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。
2 黃曲霉毒素免疫檢測方法研究現(xiàn)狀
近年來, 國內(nèi)外廣泛采用的檢測黃曲霉毒素的免疫
學(xué)方法主要有酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linked
immunosorbent assay, ELISA)、膠體金免疫層析法、免疫傳
感器、免疫親和柱-高效液相色譜法、免疫熒光法和放射免
疫法(radio immunoassay, RIA)。其中ELISA 是最經(jīng)典、最
常見的免疫學(xué)檢測方法, 免疫親和柱-高效液相色譜法是
現(xiàn)行的飼料中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 測定的國標(biāo)方法。
隨著免疫學(xué)檢測方法研究的深入進(jìn)行, 一些新方法應(yīng)運(yùn)而
生, 如時(shí)間分辨熒光免疫分析法(time resolved
fluoroimmunoassay, TRFIA)、量子點(diǎn)標(biāo)記熒光免疫法等, 檢
測性能大大提高。
2.1 常規(guī)的黃曲霉毒素檢測方法
2.1.1 酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)
ELISA 的基本原理是將已知的抗原或抗體固定在固
相載體上, 再用標(biāo)記的酶與底物反應(yīng)而顯色, 以此來判斷
是否有相應(yīng)的免疫反應(yīng)[4]。該法的優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)特異性強(qiáng)、
靈敏度高、干擾小、樣品預(yù)處理簡便、檢測結(jié)果準(zhǔn)確且穩(wěn)
定、成本低, 現(xiàn)已成為最常見的快速檢測食品中霉菌毒素
的方法[5]。
Zhang 等[6]采用改良的兩步篩選法篩選出與AFB1、
AFB2、AFGl 和AFG2 具有廣泛交叉反應(yīng)的單克隆抗體, 這
些抗體可用于同時(shí)分析樣品中總黃曲霉毒素。Guan 等[7]
采用半固體篩選法篩選出了抗AFM1 的細(xì)胞株, 該細(xì)胞株
親和力高, 且均不與AFB1、AFB2、AFGl 和AFG2 發(fā)生交
叉反應(yīng)。利用此抗體建立的超靈敏間接競爭ELISA 方法,
可用于檢測牛奶和乳制品, 檢測限分別為3 ng/L 和6 ng/L,
樣品檢測時(shí), 回收率為91%~110%, 變異系數(shù)小于10%, 與
高效液相色譜法(HPLC)檢測法的相關(guān)性很好。Jiang 等[8]
研發(fā)出一種快速、簡便、可靠的同時(shí)篩查不同食品基質(zhì)中
AFB1 和AFM1 的間接ELISA 方法, 該法的平均回收率為
73%～121%, 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%, 靈敏度與液相色譜
串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS/MS)相近。所檢測的8 個(gè)農(nóng)產(chǎn)品中
AFB1 的檢測限為(0.52+0.36) μg/kg(平均值+3SD), 4 種乳制
品中AFM1 的檢測限為(0.031+0.015) μg/kg (平均值+3SD)。
Tsakiris 等[9]調(diào)查了希臘市場上嬰幼兒奶粉中AFM1 的污染
情況, 采用ELISA 法檢測了196 份奶粉樣品, 結(jié)果陽性檢
出率為46.5%, 其中2 份樣品超過了歐盟要求的最大限量。
Yu 等[10]建立了一種高靈敏度的ELISA 方法。通過改變包
被抗體的濃度來改變抗體的活性, 使之達(dá)到最佳狀態(tài)。改
進(jìn)后的ELISA 法, 其靈敏度可達(dá)0.0015 ng/mL。Sun 等[5]
研究并評估了5 個(gè)用于檢測AFB1 的商業(yè)ELISA 試劑盒的
質(zhì)量, 結(jié)果表明, 5 個(gè)來自不同供應(yīng)商生產(chǎn)的AFB1 試劑盒
的質(zhì)量區(qū)別顯著。
2.1.2 膠體金免疫層析法
膠體金免疫層析技術(shù)是于20 世紀(jì)80 年代在ELISA、
乳膠凝集試驗(yàn)、單克隆抗體技術(shù)、膠體金免疫技術(shù)和新材
料技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種免疫分析方法, 它是以膠
體金為顯色媒介, 利用免疫學(xué)中抗原與抗體能夠特異性結(jié)
合原理, 在層析過程中完成反應(yīng), 從而進(jìn)行檢測。膠體金免
疫層析法在現(xiàn)場監(jiān)控和大規(guī)模樣品篩查時(shí)發(fā)揮了巨大作用,
已被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)診斷檢測, 在農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測
中也得到了應(yīng)用[11-15]。
3532 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào) 第6 卷
Wang 等[16]研制出一種用于檢測乳及乳制品中的
AFM1 納米金免疫層析試紙條。該試紙條檢測AFM1 所需
時(shí)間為10 min, 檢測限為0.028 ng/mL, 15 種受檢乳及乳制
品中, 有6 種受到輕微的AFM1 污染, 所有樣品中AFM1
含量均低于1 ng/mL。Song 等[17]研制出了針對黃曲霉毒素、
玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇3 類真菌毒素進(jìn)行同
時(shí)定性、定量檢測的免疫膠體金試紙條, 檢測限分別為
0.05、1 和3 μg/kg, 回收率為80%~122%。Chen 等[18]建立
了基于膠體金抗體探針快速檢測AFB1 的競爭免疫層析法,
該方法特異性強(qiáng), 對其他常見的黃曲霉毒素(AFB2、AFM1、
AFG2、AFG1)基本無交叉反應(yīng)。對AFB1 標(biāo)準(zhǔn)液和食品樣
品的檢測限分別為0.5 ng/mL、10 μg/kg。
2.1.3 免疫傳感器
免疫傳感器是將高靈敏的傳感技術(shù)與特異性免疫反
應(yīng)結(jié)合起來, 用于監(jiān)測抗原抗體反應(yīng)的傳感器[19]。其基本
原理與傳統(tǒng)的免疫檢測方法一致, 也是將抗原或抗體固定
在載體上。特殊之處在于要運(yùn)用傳感器來測量電流、電位
等變化情況并以此達(dá)到檢測的目的。因其具有快速、靈敏
和儀器設(shè)備簡單等優(yōu)點(diǎn)[20], 在用于黃曲霉毒素分析時(shí)受到
國內(nèi)外研究者的廣泛關(guān)注[21,22]。
Dinckaya 等[23]研制了一種新型免疫傳感器用于快速
檢測AFM1, 該傳感器是以納米金粒子為金電極, 搭配半
胱胺的單層膜, 外加探測器組成。其檢測AFM1 的濃度范
圍為1~14 ng/mL, 偏差為0.36 ng/mL。基于無標(biāo)記的電化
學(xué)阻抗譜, Chen 等[24]研制了一種快速檢測AFB1 的新型免
疫傳感器。該傳感器是由1,6-己二硫醇、膠體金、黃曲霉
毒素-牛血清白蛋白(AFB1-BSA)通過自組裝技術(shù)的金電極
上逐步固定化而形成。在優(yōu)化條件下, AFB1 檢測濃度范圍
為0.08~100 ng/mL, 阻抗增量呈線性關(guān)系, 相關(guān)系數(shù)為
0.9919, 檢測限為0.05 ng/mL。馮甜等[25]采用循環(huán)伏安法對
使用AFB1 和羧基化單壁碳納米管構(gòu)建的雙層免疫傳感器進(jìn)
行驗(yàn)證, 研究了抗體孵育時(shí)間和樣品前處理方法對檢測結(jié)
果的影響。結(jié)果顯示AFB1 抗體和二抗的最佳孵育時(shí)間為90
min, 且不同的前處理方法對檢測結(jié)果影響較大。此外, 粗提
溶液經(jīng)過AFB1 親和柱純化、濃縮能夠有效排除樣品基質(zhì)干
擾物對測定結(jié)果的影響, 并得出了電化學(xué)免疫傳感器穩(wěn)定
性受到抗體孵育時(shí)間以及樣品前處理等因素影響的結(jié)論。
Liu 等[26]研制了一種基于CdS-Fe3O4 納米復(fù)合材料檢測花生
中AFB1 的光電管傳感器。在最佳條件下, 該傳感器的檢測
限為5.0×10-3 ng/mL, 線性范圍為0.1~80 ng/mL。
2.1.4 免疫親和柱-高效液相色譜法
免疫親和柱-高效液相色譜法是將樣品中的黃曲霉毒
素用適當(dāng)比例的甲醇-水的提取液進(jìn)行過濾、稀釋后, 用免
疫親和柱凈化, 甲醇將親和柱上的黃曲霉毒素淋洗下來,
在淋洗液中加入溴溶液衍生, 以提高檢測的靈敏度, 然后
用熒光分光光度計(jì)定量。也可以將甲醇-黃曲霉毒素淋洗液
的一部分注入HPLC 中, 對黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2
分別進(jìn)行定量分析[27]。
陳冬東等[28]將試樣進(jìn)行離心處理、免疫親和柱凈化后,
再應(yīng)用液相色譜-紫外法檢測牛奶及奶粉中AFM1。結(jié)果表
明, 不同加標(biāo)水平下牛奶和奶粉添加AFM1 回收率分別為
87.4%~108%、89.5%~103%, RSD 分別為2.61%~7.83%和
2.07%~4.15%, 檢測牛奶、奶粉樣品的靈敏度分別為0.1
ng/mL、2.0 ng/g。朱鵬飛等[29]采用免疫親和層析柱凈化、
柱前衍生、高效液相色譜熒光檢測器測定的方法, 分析糧
谷類食物(包括花生醬、大米、玉米)中AFB1、AFB2、AFG1、
AFG2 的含量, 結(jié)果表明在0.15~50 ng/mL 時(shí), 所得回歸方
程的相關(guān)系數(shù)均大于0.99, AFB1、AFG1 的方法檢測限為
0.10 ng/g, AFB2、AFG2 的方法檢測限為0.03 ng/g。該方法
的精密度為0.13%~9.5%, 加標(biāo)回收率為70%~106%。
2.1.5 免疫熒光法
免疫熒光技術(shù)是將己知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素
或有熒光的物質(zhì), 制成熒光標(biāo)記物, 再用這種熒光抗體(或
抗原)作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗
體)。然后用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察, 從而確定抗原或抗體的
性質(zhì), 并對其進(jìn)行定位及定量分析[30,31]。該方法通常與免
疫層析法配合使用。
Beloglazova 等[32]用熒光標(biāo)記技術(shù)定量測定牛奶中
AFM1, 得到的最低檢出限達(dá)0.014 μg/kg, 假陽性和假陰性
結(jié)果的比率分別為2.6%和3.3%, 均低于5%。李衛(wèi)麗[33]以
60%甲醇提取樣品中黃曲霉毒素, 經(jīng)免疫親和柱凈化、洗
脫后, 用熒光光度計(jì)進(jìn)行檢測, 將該方法與免疫親和柱-高
效液相色譜法檢測結(jié)果進(jìn)行對比, 結(jié)果表明, 2 種方法的精
密度回收率高, 檢出限均能夠滿足歐盟針對花生中黃曲霉
毒素最新限量的要求。
2.1.6 放射免疫法(RIA)
RIA 與ELISA 方法的原理相似, 唯標(biāo)記物不同,
ELISA 標(biāo)記的主要是類似辣根過氧化物酶一類的物質(zhì), 而
RIA 使用的標(biāo)記物則是一類具有放射性的元素[34,35]。閏磊
等[36]采用放射免疫分析方法檢測牛奶樣品中黃曲霉毒素,
檢出限可達(dá)0.25 g/kg。
2.2 黃曲霉毒素檢測的新技術(shù)
2.2.1 時(shí)間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)
TRFIA 是使用三價(jià)稀土離子代替酶標(biāo)物或其他熒光
物質(zhì), 用時(shí)間分辨熒光儀來測定樣品中熒光強(qiáng)度, 從而進(jìn)
行定量。TRFIA 利用稀土離子的熒光波長與激發(fā)波長之間
的巨大差異, 克服了普通分光光度法中雜色光的影響, 因
而靈敏度得以提高。一般熒光物質(zhì)光譜的Stokes 位移非常
小, 只有幾十納米, 導(dǎo)致激發(fā)光譜和發(fā)射光譜通常會(huì)出現(xiàn)
疊加到一起的現(xiàn)象, 彼此產(chǎn)生較大的影響。所以TRFIA 方
法的優(yōu)點(diǎn)就在于鑭系離子在經(jīng)過一定的螯合反應(yīng)后,
第9 期 畢水蓮, 等: 免疫法快速檢測食品中黃曲霉毒素的研究進(jìn)展 3533
Stokes 位移能夠達(dá)到200 nm 以上, 很容易分辨激發(fā)光和發(fā)
射光, 從而可以排除激發(fā)光的干擾, 此外, 它合成的螯合
物熒光的衰變時(shí)間非常長, 為傳統(tǒng)熒光的103~106 倍[37]。
Huang 等[38]建立了以Eu3+螯合物為標(biāo)簽用于檢測黃
曲霉毒素的雙標(biāo)記TRFIA, 結(jié)果表明, 該方法檢測AFB1
的靈敏度為0.02 μg/L, 測量范圍為0.02~100 μg/L, 批內(nèi)和
批間變異系數(shù)分別為3.2%和7.3%, 平均回收率為88.1%。
張兆威等[39]通過對銪標(biāo)記TRFIA進(jìn)行方法學(xué)考核, 測定花
生、稻米、植物油等樣品中AFB1。得出該法檢測花生樣品
中AFB1 的檢測限為0.3 μg/kg, 線性范圍為0.8～25 μg/kg。
批內(nèi)添加回收率在81.0%～113.0%之間, 變異系數(shù)范圍是
7.2%～14.2%; 批間添加回收率在75.8%~114.9%之間, 變
異系數(shù)范圍是7.7%～15.3%, 批間和批內(nèi)都具有良好的準(zhǔn)
確度和精密度。
2.2.2 量子點(diǎn)標(biāo)記熒光免疫法
量子點(diǎn)(quantum dots, QDs)又稱半導(dǎo)體納米晶體, 具
有良好的化學(xué)惰性、優(yōu)良的熒光性能和良好的生物相容性,
且毒性低、易于合成[40]。與傳統(tǒng)有機(jī)染料相比, 量子點(diǎn)具
有發(fā)射光譜窄、激發(fā)光譜寬、熒光可通過控制粒徑進(jìn)行調(diào)
節(jié)等光學(xué)特性[41], 被廣泛應(yīng)用于重金屬檢測、生物成像等
領(lǐng)域[42-47]。近年來, 將量子點(diǎn)作為一種新型熒光標(biāo)記物的
免疫法開始逐步應(yīng)用于黃曲霉毒素的檢測[48]。
Zhang 等[49]提出了一種對AFB1 使用量子點(diǎn)作為熒光
標(biāo)記的熒光免疫分析法。將T 碲化鎘量子點(diǎn)成功連接到
AFB1 單克隆抗體上, 基于共軛配合物, 進(jìn)行直接競爭鏈接
熒光酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。在AFB1 空白花生示例設(shè)置的3
個(gè)級別(0.075、0.3 和0.15 ng/g)下, 得到的檢測限為0.016
ng/mL, 回收率為85%~117%, 變異系數(shù)也小于10%。
3 各種免疫檢測方法的比較
各種黃曲霉毒素免疫檢測方法均有其各自的優(yōu)缺點(diǎn)
及適用范圍, 見表1。
表1 各種黃曲霉毒素免疫檢測方法的對比
Table 1 Comparison of different detection methods of aflatoxin by immunising technology
檢測方法 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn)
ELISA
反應(yīng)快速、靈敏度高、干擾小、對樣品純度要求不高、樣
品預(yù)處理簡便、檢測結(jié)果穩(wěn)定且準(zhǔn)確, 適合大批量樣品的
檢測
對檢測人員和酶標(biāo)儀器的要求均較高, 檢測時(shí)間
較長, 不適合現(xiàn)場快速檢測
膠體金免疫層析法
操作過程簡單, 不需要任何儀器設(shè)備, 成本低, 檢測快速,
結(jié)果判定簡單直觀, 既適用于大批量樣品中黃曲霉毒素的
初篩, 也適合現(xiàn)場的快速檢測
靈敏度低, 只能定性檢測
免疫傳感器
操作簡便、靈敏度高、有機(jī)溶劑的用量少、耗時(shí)短, 適合
痕量黃曲霉毒素的檢測
實(shí)驗(yàn)結(jié)果復(fù)雜、檢測系統(tǒng)抗干擾能力較差, 難以實(shí)
現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化, 不適合大批量樣品的檢測
免疫親和柱-高效
液相色譜法
無需熒光檢測器, 靈敏度高, 前處理簡便, 實(shí)用性強(qiáng) 分析成本高, 液相色譜儀價(jià)格及日常維護(hù)費(fèi)用昂貴
免疫熒光法 特異性高, 抗原制備較容易
較難達(dá)到分析自動(dòng)化, 檢測成本較高, 樣品處理完
全依賴免疫親和柱, 未經(jīng)色譜柱分離的樣品提取
液, 如果遇到復(fù)雜的基質(zhì)樣品或共存干擾物, 可能
會(huì)導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差
RIA
靈敏度高, 特異性強(qiáng), 前處理簡單, 測定周期短, 檢測速
度快
檢測成本較高, 檢測品種少, 標(biāo)記物穩(wěn)定性較差,
對環(huán)境和人體的污染非常嚴(yán)重
TRFIA 靈敏度高、線性范圍寬, 重復(fù)性和穩(wěn)定性好, 應(yīng)用前景廣闊極易受到環(huán)境中稀土元素的污染
量子點(diǎn)標(biāo)記熒光免
疫法
量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度大、壽命長、穩(wěn)定性好, 方法簡單易行, 應(yīng)
用范圍廣
需要專門的檢測儀器, 可能存在非特異性結(jié)合的
量子點(diǎn), 從而降低量子點(diǎn)檢測的靈敏度
3534 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào) 第6 卷
4 結(jié)論與展望
黃曲霉毒素毒性強(qiáng), 且容易污染食品, 對身體健康造
成極大的威脅。2015 年4 月24 日, 新修訂的史上最嚴(yán)《中
華人民共和國食品安全法》經(jīng)十二屆全國人大常委會(huì)第十
四次會(huì)議審議通過, 并將于2015 年10 月1 日起正式施行,
意味食品安全問題已經(jīng)成為了政府今后整治的重點(diǎn)工作之
一。以最為經(jīng)濟(jì)快捷、高效的手段提高食品中黃曲霉毒素
的檢測能力是政府和企業(yè)迫在眉睫的剛性需求, 也是國內(nèi)
外專家關(guān)注的熱點(diǎn)。為保障食用者的健康及出口貿(mào)易需要,
提高黃曲霉毒素的檢測能力, 發(fā)展快速、簡便、準(zhǔn)確、靈
敏的檢測技術(shù)已經(jīng)成為黃曲霉毒素研究中亟需解決的任務(wù)
之一。而黃曲霉毒素化學(xué)檢測方法通常存在測試成本高、
分析時(shí)間長、檢測所需樣品量大(通常>500 mL)及前處理步
驟繁瑣等缺點(diǎn), 未來將會(huì)涌現(xiàn)更多、更好的免疫檢測新方
法和新技術(shù)來克服這些不足。
參考文獻(xiàn)
[1] Wilkinson JR, Kale SP, Bhatnagar D, et al. Expression profiling of
non-aflatoxigenic Aspergillus parasiticus mutants obtained by
5-azacytosine treatment or serial mycelial transfer [J]. Toxins, 2011, 3(8):
932?948.
[2] Bryden WL. Mycotoxin contamination of the feed supply chain:
Implications for animal productivity and feed security [J]. Anim Feed Sci
Tech, 2012, 173(1): 134?158.
[3] Medina A, Rodriguez A, Magan N. Effect of climate change on
Aspergillus flavus and aflatoxin B1 production [J]. Front Microbiol, 2014,
5: 348.
[4] Gan SD, Patel KR. Enzyme immunoassay and enzyme-linked
immunosorbent assay [J]. J Invest Dermatol, 2013, 133(9): e12.
[5] Sun DD, Gu X, Li J, et al. Quality evaluation of five commercial enzyme
linked immunosorbent assay kits for detecting aflatoxin B1 in feedstuffs [J].
Asian Austral J Anim, 2015, 28(5): 691?696.
[6] Zhang D, Li P, Zhang Q, et al. Production of ultrasensitive Genetic
monoclonal antibodies against major aflatoxins using a modified two-step
screening procedure [J]. Anal Chim Acta, 2009, 636(1): 63?69.
[7] Guan D, Li P, Zhang Q, et al. An ultra-sensitive monoclonal
antibody-based competitive enzyme immunoassay for aflatoxin M1 in milk
and infant milk products [J]. Food Chem, 2011, 125(4): 1359?1364.
[8] Jiang W, Wang Z, Nolke G, et al. Simultaneous determination of aflatoxin
B1 and aflatoxin M1 in food matrices by enzyme-linked immunosorbent
assay [J]. Food Anal Method, 2013, 6(3): 767?774.
[9] Tsakiris IN, Tzatzarakis MN, Alegakis AK, et al. Risk assessment
scenarios of children’s exposure to aflatoxin M1 residues in different milk
types from the Greek market [J]. Food Chem Toxicol, 2013, 56: 261?265.
[10] Yu FY, Gribas AV, Vdovenko MM, et al. Development of ultrasensitive
direct chemiluminescent enzyme immunoassay for determination of
aflatoxin B1 in food products [J]. Talanta, 2013, 107: 25?29.
[11] Hou W, Wang S, Wang X, et al. Development of colloidal gold
immunochromatographic strips for detection of Riemerella anatipestifer
[J]. PLoS One, 2015, 10(3):e0122952.
[12] Ling S, Chen QA, Zhang Y, et al. Development of ELISA and colloidal
gold immunoassay for tetrodotoxin detetcion based on monoclonal
antibody [J]. Biosens Bioelectron, 2015, 71: 256?260.
[13] Zhang L, Li D, Liu L, et al. Development of a colloidal gold
immunochromatographic strip for the rapid detection of soft-shelled turtle
systemic septicemia spherical virus [J]. J Virol Methods, 2015, 221:
39?45.
[14] Wang Y, Deng R, Zhang G, et al. Rapid and sensitive detection of the food
allergen glycinin in powdered milk using a lateral flow colloidal gold
immunoassay strip test [J]. J Agric Food Chem, 2015, 63(8): 2172?2178.
[15] Moutet P, Lacroix LM, Robert A, et al. Directed assembly of single
colloidal gold nanowires by AFM nanoxerography [J]. Langmuir. 2015,
31(14): 4106?4112.
[16] Wang JJ, Liu BH, Hsu YT, et al. Sensitive competitive direct
enzyme-linked immunosorbent assay and gold nanoparticle
immunochromatographic strip for detecting aflatoxin M1 in milk [J]. Food
Control, 2011, 22(6): 964?969.
[17] Sone S, Liu N, Zhao Z, et al. Multiplex lateral flow immunoassay for
mycotoxin determination [J]. Anal Chem, 2014, 86(10): 4995?5001.
[18] Chen XQ, Lu SS, Sun Q, et al. Development of a colloidal gold-based
immunochromatographic assay for the rapid detection of aflatoxin B1 in
food samples [J]. Adv Mater Res, 2013, 726: 1279?1282.
[19] Turner NW, Subrahmanyam S, Piletsky SA. Analytical methods for
determination of mycotoxins: a review [J]. Anal Chim Acta, 2009, 632(2):
168?180.
[20] Arredondo M, Stoytcheva M, Zlatev R, et a1. Some clinical applications
of the electrochemical biosensors [J]. Mini Rev Med Chem, 2012, (12):
1301?1310.
[21] Yu L, Zhang Y, Hu C, et al. Highly sensitive electrochemical impedance
spectroscopy immunosensor for the detection of AFB1 in olive oil [J].
Food Chem, 2015, 176: 22?26.
[22] Wang D, Hu W, Xiong Y, et al. Multifunctionalized reduced graphene
oxide-doped polypyrrole/ pyrrolepropylic acid nanocomposite
impedimetric immunosensor to ultra-sensitively detect small molecular
aflatoxin B1 [J]. Biosens Bioelectron, 2015, 63: 185?189.
[23] Dinckaya E, Kmk O, Sezgintiirk MK, et al. Development of an
impedimetric Aflatoxin M1 biosensor based on a DNA probe and gold
nanoparticles [J]. Biosens Bioelectron, 2011, 26(9): 3806?3811.
[24] Chen L, Jiang J, Shen G, et al. A label-free electrochemical impedance
immunosensor for the sensitive detection of aflatoxin B1 [J]. Anal Method,
2015, 7(6): 2354?2359.
[25] 馮甜, 張弦, 楊弦弦, 等. 電化學(xué)免疫傳感器檢測樣品中黃曲霉毒素
B1 的誤差分析[J]. 國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 35(8): 947?948.
Feng T, Zhang X, Yang XX, et al. Study on error analysis during detecting
aflatoxin B1 in food by using electrochemical immunosensor [J]. Int J Lab
Med, 2014, 35(8): 947?948.
[26] Liu Y, Yan T, Li Y, et al. A simple label-free photoelectrochemical
immunosensor for highly sensitive detection of aflatoxin B1 based on
CdS–Fe3O4 magnetic nanocomposites [J]. RSC Adv, 2015, 5(25):
19581?19586.
[27] 張文玲, 袁濤, 李書國. 近10 年糧油食品中黃曲霉毒素檢測技術(shù)的研
究進(jìn)展[J]. 糧食加工, 2012, 37(1): 77?81.
第9 期 畢水蓮, 等: 免疫法快速檢測食品中黃曲霉毒素的研究進(jìn)展 3535
Zhang WL, Yuan T, Li SG. Research progress on the detection of aflatoxin
in grain and oil food in recent 10 years [J]. Grain Proc, 2012, 37(1):
77?81.
[28] 陳冬東, 代漢霞, 彭濤, 等. 免疫親和柱-高效液相色譜紫外法檢測牛
奶及奶粉中黃曲霉毒素M1 [J]. 中國乳品工業(yè), 2014, 42(3): 52?53.
Chen DD, Dai HX, Peng T, et al. Method for the determination of
aflatoxin M1 in milk and milk powder by immunoaffinity column clean-up
and HPLC-UV [J]. China Dairy Ind, 2014, 42(3): 52?53.
[29] 朱鵬飛, 劉文衛(wèi), 凌霞, 等. 柱前衍生-高效液相色譜熒光法測定糧谷
類食物中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 [J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2015, 25(6):
807?809.
Zhu PF, Liu WW, Ling X, et al. Determination of aflatoxin B1, B2, G1, G2
in cereal food by high performance liquid chromatography with
fluorescence detector and pre-column derivatization [J]. Chin J Health Lab
Technol, 2015, 25(6): 807?809.
[30] Op De Beeck K, Vermeersch P, Verschueren P, et al. Detection of
antinuclear antibodies by indirect immunofluorescence and by solid phase
assay [J]. Autoimmun Rev, 2011, 10(12): 801?808.
[31] Çelik S. Understanding the complexity of antigen retrieval of DNA
methylation for immunofluorescence- based measurement and an
approach to challenge [J]. J Immunol Methods, 2015, 416: 1?16.
[32] Beloglazova NV, Shmelin PS, Goryacheva IY, et al. Liposomes loaded
with quantum dots for ultrasensitive on-site determination of aflatoxin M1
in milk products[J]. Anal Bioanal Chem, 2013, 405(24): 7795?7802.
[33] 李衛(wèi)麗. 兩種方法測定花生中黃曲霉毒素之比較[J]. 吉林農(nóng)業(yè), 2011,
(8): 62.
Li WL. Comparison of two methods for determination of aflatoxin in
Peanut [J]. Jilin Agric, 2011, (8): 62.
[34] Ehrhardt RA, Slepetis RM, Siegal-Willott J, et al. Development of a
specific radio immunoassay to measure physiological changes of
circulating leptin in cattle and sheep [J]. J Endocr, 2000, 166(3): 519?528.
[35] Jafri L, Khan AH, Siddiqui AA, et al. Comparison of high performance
liquid chromatography, radio immunoassay and electrochemiluminescence
immunoassay for quantification of serum 25 hydroxy vitamin D [J]. Clin
Biochem, 2011, 44(10?11): 864?868.
[36] 閆磊, 李卓, 張燕. 牛奶中黃曲霉毒素的放射免疫法檢測 [J]. 食品研
究與開發(fā), 2010, 31(1): 135?137.
Yan L, Li Z, Zhang Y. Aflatoxins in milk by radio immunoassay method
[J]. Food Res Dev, 2010, 31(1): 135?137.
[37] Hagan AK, Zuchner T. Lanthanide-based time-resolved luminescence
immunoassays [J]. Anal Bioanal Chem, 2011, 400(9): 2847?2864.
[38] Huang B, Xiao H, Zhang J, et al. Dual-label time-resolved
fluoroimmunoassay for simultaneous detection of aflatoxin B1 and
ochratoxin A [J]. Arch Toxicol, 2009, 83(6): 619?624.
[39] 張兆威, 李培武, 張奇, 等. 農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉毒素的時(shí)間分辨熒光免疫
層析快速檢測技術(shù)研究[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2014, 47(18): 3668?3674.
Zhang ZW, Li PW, Zhang Q, et al. Study on immunochromatography for
aflatoxin determination in agricultural product [J]. Sci Agric Sin, 2014,
47(18): 3668?3674.
[40] Shen JH, Zhu YH, Yang XL, et al. Graphene quantum dots : emergent
nanolights for bioimaging , sensors, catalysis and photovoltaic devices [J].
Chem Commun, 2012, 48(31): 3686?3699.
[41] Perez-Lopez B, Merkoci A. Nanoparticles for the development of
improved (bio) sensing systems [J]. Anal Bioanal Chem, 2011, 399(4):
1577?1590.
[42] Liu M, Liu T, Li Y, et al. A FRET chemsensor based on graphene quantum
dots for detecting and intracellular imaging of Hg(2.) [J]. Talanta, 2015,
143: 442?449.
[43] Liu H, Tang W, Li C, et al. CdSe/ZnS quantum dots-labeled mesenchymal
stem cells for targeted fluorescence imaging of pancreas tissues and
therapy of type 1 diabetic rats [J]. Nanoscale Res Lett, 2015, 10(1): 959.
[44] Dong YQ, Wang RX, Li GL, et al. Polyamine-functionalized carbon
quantum dots as fluorescent probes for selective and sensitive detection of
copper ions [J]. Anal Chem, 2012, 84(14): 6220?6224.
[45] Zhang RZ, Chen W. Nitrogen-doped carbon quantum dots: Facile
synthesis and application as a "turn -off" fluorescent probe for detection of
Hg2+ ions [J]. Biosens Bioelectron, 2014, 55: 83?90.
[46] Ananthanarayanan A, Wang XW, Routh P, et al. Facile synthesis of
graphene quantum dots from 3D graphene and their application for Fe3+
sensing [J]. Adv Funct Mater, 2014, 24(20): 3021?3026.
[47] Zheng XT, Than A, Ananthanarayanan A, et al. Graphene quantum dots as
universal fluorophores and their use in revealing regulated trafficking of
insulin receptors in adipocytes [J]. Acsnano, 2013, 7(7): 6278?6286.
[48] Beloglazova NV, Shmelin PS, Goryacheva IY, et al. Liposomes loaded
with quantum dots for ultrasensitive on-site determination of aflatoxin M1
in milk products [J]. Anal Bioanal Chem, 2013, 405(24): 7795?7802.
[49] Zhang Z, Li Y, Li P, et al. Monoclonal antibody-quantum dots CdTe
conjugate-based fluoroimmunoassay for the determination of aflatoxin B1
in peanuts [J]. Food Chem, 2014, 146: 314?319.
[50] Zhang Z, Tang X, Wang D, et al. Rapid on-site sensing aflatoxin B1 in
food and feed via a chromatographic time-resolved fluoroimmunoassay [J].
PLoS One. 2015, 10(4): e0123266.
(責(zé)任編輯: 李振飛)
作者簡介
畢水蓮, 副教授, 主要研究方向?yàn)槭?
品質(zhì)量安全及檢測技術(shù)研究。
E-mail: bishuilian@163.com

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