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高效液相色譜法在食品和藥品安全分析中的應(yīng)用

文檔作者：馬博凱1, 勾新磊1, 趙新穎1, 2* 文檔來源： 1. 北京市理化分析測試中心 2. 北京市科學(xué)技術(shù)研究院分析測試技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室		點(diǎn) 擊數(shù)：	更新時(shí)間： 2025年06月13日
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上一篇：高效液相色譜技術(shù)在食品檢測中的具體應(yīng)用

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第7 卷 第11 期 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào) Vol. 7 No. 11
2016 年11 月 Journal of Food Safety and Quality Nov. , 2016
*通訊作者: 趙新穎, 副研究員, 主要研究方向?yàn)樯镝t(yī)藥分析方向。E-mail: zhaoxinying_123@sina.com
*Corresponding author: ZHAO Xin-Ying, Associate Researcher, Beijing Centre for Physical and Chemical Analysis, Beijing Key Laboratory of
Organic Materials Testing Technology &amp;amp; Quality Evaluation, Beijing Academy of Science and Technology Key Laboratory of Analysis and Testing
Technology, Beijing 10089, China. E-mail:zhaoxinying_123@sina.com
高效液相色譜法在食品和藥品安全分析中的應(yīng)用
馬博凱1, 勾新磊1, 趙新穎1, 2*
(1. 北京市理化分析測試中心, 有機(jī)材料檢測技術(shù)與質(zhì)量評價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 北京 100089;
2. 北京市科學(xué)技術(shù)研究院分析測試技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 北京 100089)
摘要: 高效液相色譜法(high performance liquid chromatography, HPLC)是一種常用完善的分離技術(shù), 常用于
解決多種分析問題, 它能夠分離各種基質(zhì)中復(fù)雜的混合物, 包括從低和高分子量化合物到不同的極性和酸堿
性的化合物, 能滿足大量分析物在食品和藥品領(lǐng)域中的檢測需求。高效液相色譜法具有分離效率高、選擇性好、
檢測靈敏度高和操作自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。本文簡要介紹了高效液相色譜法的特點(diǎn)以及在食品和藥品檢測領(lǐng)域中的
應(yīng)用。
關(guān)鍵詞: 高效液相色譜法; 食品; 藥品; 安全分析
Application of high performance liquid chromatography in food and drug
safety analysis
MA Bo-Kai1, GOU Xin-Lei1, ZHAO Xin-Ying1, 2*
(1. Beijing Centre for Physical and Chemical Analysis, Beijing Key Laboratory of Organic Materials Testing
Technology &amp;amp; Quality Evaluation, Beijing 100089, China; 2. Beijing Academy of Science and Technology Key
Laboratory of Analysis and Testing Technology, Beijing 100089, China)
ABSTRACT: High performance liquid chromatography (HPLC) is a common and well-established separation
technique which is frequently used to solve multiple analytical problems, as it is able to separate quite complicated
mixtures in various matrices, including low and high molecular weight compounds as well as different polarities and
acid-base properties, which can meet the detection needs of variety of analytes in the food and pharmaceutical
industry. HPLC has the advantages of high separation efficiency, good selectivity, high sensitivity and operation
automation, etc. In this paper, the characteristics of HPLC and its application in food and drug detection were briefly
introduced.
KEY WORDS: high performance liquid chromatography; food; drug; safety analysis
1 引 言
高效液相色譜法(high performance liquid
chromatography, HPLC)是20 世紀(jì)60 年代發(fā)展起來的一種
新型分離分析技術(shù), 經(jīng)過數(shù)十年的發(fā)展, 已在醫(yī)藥、食品、
生命科學(xué)、環(huán)境檢測等領(lǐng)域成為了一種不可或缺的分析手
段[1]。由于高效液相色譜法具備高速高效、高靈敏度、高
自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn), 已經(jīng)廣泛應(yīng)用于檢測機(jī)構(gòu)行業(yè)中, 并備受
分析工作者青睞。
隨著我國社會(huì)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展, 食品和藥品安全問
題日益凸顯, 人們越來越重視食品和藥品安全問題。落實(shí)
好藥品質(zhì)量監(jiān)控和食品安全任務(wù), 才能有力保障人們身體
萬方數(shù)據(jù)
4296 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào) 第7 卷
健康安全。高效液相色譜分析技術(shù)是食品藥品檢測技術(shù)中
一種分離速度快、分離效能與檢測靈敏度高的現(xiàn)代分離技
術(shù), 同時(shí)該技術(shù)可以與多種檢測器聯(lián)用, 應(yīng)用更加廣泛。本
文主要結(jié)合高效液相色譜法特點(diǎn)在其食品藥品檢測分析中
的應(yīng)用進(jìn)行簡要分析。
2 高效液相色譜法的特點(diǎn)
高效液相色譜法是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來
的一種色譜方法[2]。與經(jīng)典液相色譜法相比, 填料顆粒細(xì)小,
采用高壓輸液泵輸送流動(dòng)相, 具有分離效率高、速度快等優(yōu)
點(diǎn)[3], 從而提高工作效率, 還可以結(jié)合不同種類的檢測器如
二極管陣列檢測器、示差折光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器和
熒光檢測器, 在食品藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用范圍較廣。
與氣相色譜法相比, 高效液相色譜法的分析對象沸
點(diǎn)較高, 檢測物質(zhì)占有機(jī)化合物總數(shù)近80%[4]。此外, 高效
液相色譜法結(jié)合的檢測器可以保留分離物的完整性及活性,
作為純化收集分析物的一種手段, 已經(jīng)廣泛應(yīng)用于制備化
學(xué)和生命科學(xué)中。另外, 氣相色譜法采用的流動(dòng)相是惰性
氣體, 它對組分沒有親和力, 即不產(chǎn)生相互作用力, 僅起
運(yùn)載作用。高效液相色譜法中流動(dòng)相種類多, 選擇范圍廣,
還可以通過改變流動(dòng)相的pH 值, 改善極性大的化合物的
色譜峰型。因此, 流動(dòng)相對分離效果起了很大的作用, 這更
有利于選擇最佳分離條件。
高效液相色譜法還可與質(zhì)譜儀聯(lián)用, 聯(lián)用技術(shù)相互
彌補(bǔ)了色譜和質(zhì)譜兩者不足之處, 兩者相輔相成, 實(shí)際應(yīng)
用更廣泛, 為分離和鑒別混合物提供了更好的分析平臺(tái),
同時(shí)為分析工作者提供了既可靠又準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。
3 HPLC 在食品安全分析中的應(yīng)用
3.1 抗氧化劑類
抗氧化劑可以作為防霉和保鮮作用, 方便人們儲(chǔ)存
食品。但是, 不規(guī)范的使用添加會(huì)對人類健康造成危害。
乙氧基喹啉是優(yōu)良的飼料抗氧化劑之一, 可防止飼料中油
脂、維生素A、維生素E 的氧化變質(zhì), 還可以讓水果達(dá)到
保鮮作用[5]。黃超群等[5]通過引入另一抗氧化劑, 有效抑制
了乙氧基喹啉的氧化反應(yīng), 經(jīng)正己烷提取、乙腈定容、C18
色譜柱分離, 以乙腈和水作為流動(dòng)相梯度洗脫和熒光法測
定, 方法定量限是0.05 mg/kg。叔丁基羥基茴香醚、二叔
丁基羥基甲酚、沒食子酸丙酯和特丁基對苯二酚作為抗氧
化劑常用于在油性食品中使用[6]。林海宏[7]用甲醇勻質(zhì)提
取后, 乙酸水溶液(pH 3.0)甲醇為流動(dòng)相, 經(jīng)C18 色譜柱分
離, 紫外波長280 nm 下檢測, 檢出限分別為0.26、0.10、
0.16 和0.16 μg/mL, 回收率為93.8%~102.4%。
3.2 微生物代謝類
很多真菌的代謝產(chǎn)物具有毒性, 如黃曲霉菌產(chǎn)生的
黃曲霉素AFB1、AFB2、AFG1 和AFG2, 主要存在于腐爛
的花生和大米中, 這些毒素可致畸致癌, 嚴(yán)重影響正?；?
細(xì)胞[8]。黃曲霉素具有熒光特性, 可通過熒光檢測器來進(jìn)
行檢測[9,10]。在正相體系中, 熒光檢測器能檢測到納克水平
的AFG1 和AFG2, 而由于流動(dòng)相原因, AFB1 和AFB2
[6]發(fā)生
熒光猝滅而無法被檢測到。Manabe 等[11]發(fā)現(xiàn)往流動(dòng)相添
加有機(jī)酸可以增加AFB1 和AFB2 的熒光強(qiáng)度。在反相體系
中, AFB1 和AFG1 熒光強(qiáng)度很低[12,13], 無法實(shí)現(xiàn)檢測。Kok
等[14]提出用溴作為柱前衍生化試劑來解決此問題, 但缺點(diǎn)
是產(chǎn)物穩(wěn)定性差。Garner 等[15]通過用三溴化吡啶鎓作為衍
生試劑克服了這個(gè)缺點(diǎn)。伏馬菌素B1 和B2 是由串珠鐮刀
菌產(chǎn)生的水溶性代謝產(chǎn)物, 主要存在于腐爛的玉米中, 人
類食用后會(huì)對人體健康產(chǎn)生極大的危害。Khayoon 等[16]建
立了高效液相色譜法檢測玉米、大米和果汁中伏馬菌素B1
和B2的含量, 色譜柱為C18, 流動(dòng)相為甲醇-0.1 mol/L 磷酸
二氫鉀(78:22, V:V), 采用熒光檢測器檢測, 激發(fā)波長為
335 nm, 發(fā)射波長為440 nm, 該方法簡單且靈敏度高。
3.3 糖 類
糖類在食品中影響食品質(zhì)構(gòu)、風(fēng)味、穩(wěn)定性、甜味等
性質(zhì), 同時(shí)也是食品中的主要營養(yǎng)素。但是人類攝入過多
的糖類物質(zhì), 會(huì)導(dǎo)致高血壓、高血脂和糖尿病等疾病發(fā)生。
調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)可以預(yù)防疾病的發(fā)生, 控制每天攝入糖的含
量可以有效減緩疾病進(jìn)一步惡化。采用高效液相色譜-蒸發(fā)
光散射檢測法不僅可以避免前處理衍生化的繁瑣, 而且還
能保證食品中基質(zhì)的分離, 有效避免基質(zhì)對分析目標(biāo)物的
干擾。丁洪流等[17]建立了高效液相色譜法同時(shí)檢測食品中
常用的13 種單糖、雙糖、低聚果糖和糖醇的含量, 該方法
采用ZORBAX NH2 柱(250 m×4.6 mm, 5 μm), 以乙腈-水
為流動(dòng)相梯度洗脫, 蒸發(fā)光散射檢測器檢測, 檢出限均在
0.1 g/L 以下, 回收率為96.1%~105.2%。
4 HPLC 在藥品領(lǐng)域的應(yīng)用
4.1 手性藥物分析
手性藥物往往呈現(xiàn)一種對映體, 具有強(qiáng)的生物活性
和藥效, 而另外一種卻無效。由于對映體的物理化學(xué)性質(zhì)
相同, 實(shí)現(xiàn)其分離很困難。對于制藥行業(yè)和監(jiān)管部門來說,
手性藥物的檢測仍具有挑戰(zhàn)性[18]。對于手性藥物對映異構(gòu)
體的拆分也是HPLC 法分析的熱點(diǎn)。HPLC 法拆分手性藥
物對映體可分為直接法和間接法[4]。直接法常用的方法是
手性流動(dòng)相添加劑(chiral mobile phase additives, CMPA)法,
張虎等[19]以磺丁基醚-β-環(huán)糊精(SBE-β-CD)作為手性流動(dòng)
相添加劑, 建立了阿卓乳酸對映體的高效液相色譜拆分方
法。該方法分離好, 簡便易行, 比使用手性固定相分離更加
經(jīng)濟(jì)。間接法是將手性試劑衍生化法, 它是將不對稱中心
引入分子內(nèi), 如欒燕等[20]采用二氯亞砜和S-(-)-1-(1-奈基)
萬方數(shù)據(jù)
第11 期 馬博凱, 等: 高效液相色譜法在食品和藥品安全分析中的應(yīng)用 4297
乙胺作為衍生化試劑, 分離S-(+)-酮洛芬和R-(-)-酮洛芬衍
生化產(chǎn)物, 該方法衍生化產(chǎn)物穩(wěn)定, 方法靈敏度高。
4.2 藥物中有效成分含量分析
藥物有效成分的含量直接影響著藥物的內(nèi)在質(zhì)量和
臨床療效, 是藥物質(zhì)量控制的關(guān)鍵。
如果藥物有效成分含量過低, 則達(dá)不到藥物療效, 耽
誤患者治療最佳時(shí)機(jī)。高效液相色譜法因其準(zhǔn)確、高效的
特點(diǎn), 己成為藥檢工作者洞察藥品內(nèi)在質(zhì)量的眼睛[21]。黃
松等[22]建立測定婦科栓劑中氧化苦參堿、苦參堿和小檗堿
含量的高效液相色譜法, 采用Kromasil C18 色譜柱分離,
以甲醇-乙腈-乙酸銨緩沖溶液(濃氨水調(diào)pH 至8.5)為流動(dòng)
相進(jìn)行梯度洗脫, 在波長220 nm 和265 nm 下檢測, 獲得
了較高準(zhǔn)確度。方強(qiáng)等[23]建立了反相高效液相色譜法測定
安胃片中延胡索乙素含量的方法。
5 總 結(jié)
高效液相色譜法已成為一種十分有效的分離分析手
段, 為檢測提供了準(zhǔn)確、可靠的分析結(jié)果, 已經(jīng)在食品和藥
品分析領(lǐng)域中發(fā)揮著重要的作用。高效液相色譜法聯(lián)合質(zhì)
譜技術(shù)也拓寬了HPLC 技術(shù)的應(yīng)用范圍, 提供了多種檢測
功能性, 提高了分析工作者的工作效率。
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(責(zé)任編輯: 姚 菲)
作者簡介
馬博凱, 助理工程師, 主要研究方向
為色譜質(zhì)譜分析。
E-mail: mabokai123@sina.com
趙新穎, 副研究員, 主要研究方向?yàn)?
生物醫(yī)藥分析。
E-mail: zhaoxinying_123@sina.com
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“乳及乳制品質(zhì)量與安全”專題征稿函
隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展和消費(fèi)者的生活質(zhì)量、安全意識(shí)的提高, 人們對于乳制品的新產(chǎn)品開發(fā)和質(zhì)量安全
提出了更為嚴(yán)格的要求, 在食品質(zhì)量安全問題日益受到關(guān)注的今天, 乳制品的質(zhì)量安全越來越受到關(guān)注。在這
種形勢下, 很多學(xué)者和企業(yè)開始關(guān)注和研究從原料乳到消費(fèi)者食用各階段的乳制品質(zhì)量安全問題。
乳品安全關(guān)乎人們的健康, 本刊特別策劃“乳及乳制品質(zhì)量與安全”專題, 由北京市疾病預(yù)防控制中心
的邵兵研究員擔(dān)任專題主編。邵兵研究員現(xiàn)任食品安全國家審評委員會(huì)檢驗(yàn)方法委員會(huì)專家委員和中心實(shí)
驗(yàn)室主任等職務(wù), 長期從事食品中農(nóng)獸藥殘留檢測、食品中毒原因篩查、環(huán)境痕量污染物檢測等相關(guān)的研究。
本專題主要圍繞國內(nèi)外乳品產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀、原料乳質(zhì)量控制及監(jiān)測、乳制品品質(zhì)檢測、乳制品營養(yǎng)和毒理
學(xué)研究、新型檢測技術(shù)在乳及乳制品中的應(yīng)用、乳制品中的功能成分研究等方面進(jìn)行論述, 計(jì)劃在2017 年
2 月出版。
本刊編輯部主編吳永寧研究員及邵兵研究員特邀各位專家為本專題撰寫稿件, 以期進(jìn)一步提升該專題的
學(xué)術(shù)質(zhì)量和影響力。綜述、研究型論文均可, 請?jiān)?016 年12 月31 日前通過網(wǎng)站或E-mail 投稿。我們將快速
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